固定是組織處理最重要的一步，也是在整個(gè)制片過(guò)程中最無(wú)法補救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細胞內的物質(zhì)盡可能接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結構和位置的過(guò)程。固定的目的是為了防止組織、細胞自溶與腐敗，防止細胞內酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細胞內的各種成分如蛋白質(zhì)抗原、脂肪、碳水化合物或酶類(lèi)轉變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結構與生活時(shí)相仿，還要最大程度地保存抗原、DNA等物質(zhì)。另外，組織固定后，具有硬化作用，增加了組織的韌性，有利于取材和組織脫水。如果標本沒(méi)有及時(shí)固定或固定不恰當，組織已經(jīng)自溶或腐敗，將無(wú)法逆轉。

固定的注意事項：

（1）固定必須及時(shí)：組織離體后，必須在1小時(shí)內放入4%中性緩沖甲醛液內固定，有特殊要求的組織如胃癌檢測Her2應在30分鐘內放入4%中性緩沖甲醛液內固定。

（2）固定液的選擇：4%中性緩沖甲醛液。

（3）固定液的pH：7.0。

（4）固定液的量：必須大于組織體積的4-10倍。

（5）固定液的濃度：濃度必須準確，過(guò)稀或過(guò)濃都會(huì )影響組織的形態(tài)和固定的效果。

（6）固定液的質(zhì)量：發(fā)現固定液變質(zhì)，如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀，應立即更換。

（7）固定的時(shí)間：新鮮標本，應該剖開(kāi)固定12-24小時(shí)后再取材。大標本取材后在室溫下還需再固定4-6小時(shí)，小標本取材后應該在室溫下再固定3-4小時(shí)，如果是新鮮小標本取材，必須再固定4-8小時(shí)。如果室內溫度低，固定時(shí)間還需延長(cháng)。

（8）固定的溫度：最好固定于室溫，如時(shí)間不夠，可放于35-45℃的全封閉組織處理機內，溫度過(guò)高，會(huì )加快組織的自溶和組織的過(guò)度收縮，加溫可破壞細胞內的抗原。

（9）固定液的滲透速度：4%中性緩沖甲醛液3-5mm/24小時(shí)。

（10）需要做免疫組化或分子病理的標本，從標本離體至組織脫水開(kāi)始，總固定時(shí)間一般不要超過(guò)48小時(shí)，同時(shí)也不要少于24小時(shí)（厚度2-3mm）。

 在中國，組織固定是病理切片質(zhì)量存在問(wèn)題的最主要原因：

1、固定不及時(shí)，手術(shù)醫生將標本離體后不及時(shí)固定。

2、沒(méi)有剖開(kāi)固定。

3、固定液量不足（包括固定容器太?。?。

4、沒(méi)有用規范的固定液。

5、固定時(shí)間不夠，有的病理科為了使病理報告盡快出來(lái)而縮短了固定時(shí)間。  

沒(méi)有充分的固定，就不可能取好材，不可能有優(yōu)質(zhì)的HE切片，也不可能有好的免疫組化和分子病理結果，因此，唯一能解決這個(gè)問(wèn)題只有靠病理科自己，建議各醫院病理科應該有專(zhuān)業(yè)標本處置人員：將手術(shù)室的標本新鮮切下后在半小時(shí)內直接送至病理科，由病理科專(zhuān)業(yè)人員剖開(kāi)、加入足量的固定液。只有這樣，才能真正將組織固定工作做好。