ChIP實(shí)驗注意事項及常見(jiàn)問(wèn)題分析

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P是利用抗原蛋白質(zhì)和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質(zhì)的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開(kāi)發(fā)出來(lái)的方法。目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。

首先，實(shí)驗最需要注意點(diǎn)就是抗體的性質(zhì)?？贵w不同和抗原結合能力也不同，免染能結合未必能用在IP反應。

其次，要注意溶解抗原的緩沖液的性質(zhì)。多數的抗原是細胞構成的蛋白，特別是骨架蛋白，緩沖液必須要使其溶解。為此，必須使用含有強界面活性劑的緩沖液，盡管它有可能影響一部分抗原抗體的結合。另一面，如用弱界面活性劑溶解細胞，就不能充分溶解細胞蛋白。即便溶解也產(chǎn)生與其它的蛋白結合的結果，抗原決定族被封閉，影響與抗體的結合，即使IP成功，也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結果。

再次，為防止蛋白的分解，修飾，溶解抗原的緩沖液必須加蛋白每抑制劑，低溫下進(jìn)行實(shí)驗。每次實(shí)驗之前，首先考慮抗體/緩沖液的比例?？贵w過(guò)少就不能檢出抗原，過(guò)多則就不能沉降在beads上，殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原，過(guò)多則抗原被稀釋。

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